诱变育种的基本步骤和方法(诱变育种的基本步骤)

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1、基本原理：紫外线诱变处理的有效波长为200~300×10nm，最适为254nm(此为核酸的吸收高峰)。

2、dna和rna的嘌呤和嘧啶吸收紫外光后，dna分子形成嘧啶二聚体，即两个相邻的嘧啶共价连接,二聚体出现会减弱双键间氢键的作用，并引起双链结构扭曲变形，阻碍碱基间的正常配对，从而有可能引起突变或死亡。

3、另外二聚体的形成，会妨碍双链的解开，因而影响dna的复制和转录。

4、总之紫外辐射可以引起碱基转换、颠换、移码突变或缺失,即是所谓的诱变。

5、主要步骤：1．将细菌培养液以3000r／min离心5min，倾去上清液，将菌体打散加入无菌生理盐水再离心洗涤。

6、2．将菌悬液放入一已灭菌的，装有玻璃珠的三角瓶内用手摇动，以打散菌体。

7、将菌液倒入有定性滤纸的漏斗内过滤，单细胞滤液装入试管内，一般处于浑浊态的细胞液含细胞数达108个／ml左右，作为待处理菌悬液。

8、3．取2～4mL制备的菌液加到直径9cm培养皿内，放入一无菌磁力搅拌子，然后置磁力拌器上、15W紫外线下30cm处。

9、在正式照射前，应先开紫外线10min，让紫外灯预热，然后开启皿盖正式在搅拌下照射10～50s。

10、操作均应在红灯下进行，或用黑纸包住，避免白炽光。

11、4．取未照射的制备菌液和照射菌液各0.5ml进行稀释分离，计数活菌细胞数。

12、5．取照射菌液2ml于液体培养基中(300ml三角瓶内装30ml培养液)，120r／min振荡培养4～6h。

13、6．取中间培养液稀释分离、培养。

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